Combinó una artesanía exquisita con el amor por el color y se hizo famoso por su habilidad para "pintar" con vidrio. Aunque se le conoce sobre todo por su trabajo en vidrio, diseñó en toda una gama de medios, desde joyería hasta cerámica, y se le asoció particularmente con el movimiento Art Nouveau, destacando como uno de sus creadores más imaginativos y prolíficos. Tiffany fue también uno de los primeros diseñadores estadounidenses aclamados en el extranjero, y su obra fue distribuida por toda Europa por Siegfried Bing, fundador de la famosa e influyente galería L'Art Nouveau.
Tiffany creía que la naturaleza debía ser la principal fuente de inspiración de sus diseños y la gran mayoría de sus piezas presentan imágenes de paisajes, plantas o animales. El amor de Tiffany por la naturaleza y su afán por incorporar las nuevas tecnologías a su obra lo alinearon estrechamente con el Art Nouveau y fue muy significativo en la introducción del movimiento en América, ayudando a popularizarlo a través de sus diseños y animando a otros a trabajar en un estilo similar.
En lugar de pintar sobre el vidrio para obtener detalles, como se hacía tradicionalmente en la producción de vidrieras, Tiffany prescindió de la pintura y utilizó sólo vidrio para crear sus objetos, dejando que las piezas de vidrio dictaran la forma del producto acabado. También trabajó para desarrollar nuevos procesos y técnicas, como el "favrile" y la formación de vidrio opalescente, que producían colores más ricos y efectos más interesantes, y le daban una mayor variedad de materias primas. Estas innovaciones le permitieron crear piezas increíblemente intrincadas que eran totalmente novedosas en el campo de la fabricación de vidrio.
La obra de Tiffany se nutrió de influencias muy diversas, desde el movimiento Arts and Crafts de Inglaterra, que le sirvió de base para su trabajo artesanal, hasta fuentes históricas y clásicas. Le interesaban especialmente las obras de China, Japón, India y el mundo islámico, y su perspectiva orientalista puede apreciarse en sus primeras pinturas, así como en los motivos y elementos decorativos de sus diseños posteriores.