Los temas de las obras de Jacopo Bassano reflejan una amplia gama de intereses y preocupaciones, que van desde la representación de la vida cotidiana hasta la narración de los acontecimientos sagrados. Su producción artística se caracteriza por un fuerte vínculo con el contexto rural y popular de la región del Véneto, que claramente emerge en sus pinturas de escenas de la vida cotidiana.
Su padre, Francesco Bassano el Viejo, fue un «artista aldeano» y Jacopo adoptó algo de su estilo cuando introdujo en sus pinturas religiosas detalles realistas, incluyendo animales, granjas y paisajes; «hasta el extremo de que sus cuadros más parecen simples composiciones de género, que cuadros religiosos». La introducción de estos elementos que llenan las composiciones tuvieron luego gran importancia en los orígenes del naturalismo barroco.
Entre mediados de la década de 1540 y finales de la de 1550, Jacopo Bassano creó su versión del manierismo, en boga en Venecia. Los cuerpos estirados y los grandes efectos de composición equilibrada no le hicieron, sin embargo, abandonar los vestidos de sus poderosos animales. Al final de su carrera, el género pastoral que le había hecho famoso recibió encargos de coleccionistas venecianos. Los pintó en un paisaje crepuscular salpicado por los efectos casi teatrales del claroscuro. A propósito de uno de sus últimos lienzos, La Deposición del Museo de Lisboa, W. R. Rearick «cree que Jacopo probablemente lo envió a Venecia para que sirviera de modelo en el taller de su hijo Francesco, que realizó la mayoría de las versiones conocidas del tema (incluida la versión del Louvre)».
Bassano comenzó a experimentar con la luz y sus temas hacia 1550-1570, y fue en esta época cuando se convirtió en uno de los primeros artistas en pintar un «nocturno», es decir, un cuadro ambientado en un paisaje nocturno con iluminación artificial. Este tipo de pintura gozó de gran popularidad entre el público local e hizo muy populares los cuadros de Bassano. En sus obras también empezaron a aparecer elementos pastorales, pintados por su padre y que formaban parte de su entorno. En lugar de situar escenas religiosas en escenarios romanos clásicos (como hacían sus homólogos renacentistas), situó figuras en un paisaje más natural, donde los árboles y las flores estaban tan cuidadosamente representados como sus figuras.
Uno de los aspectos más distintivos del trabajo de Bassano es el uso innovador del color y la luz. Bassano aplicó el color con una vivacidad que era poco común para su época. Sus paletas suelen ser ricas y luminosas, caracterizadas por tonos cálidos y saturados que crean un efecto casi dramático. La luz en sus pinturas no es sólo una fuente de iluminación, sino que se convierte en un elemento narrativo, capaz de acentuar la atmósfera y guiar la mirada del espectador. El juego de la luz y la sombra no son meras representaciones de la realidad, sino herramientas para expresar la profundidad emocional y crear una sensación de espacio y tridimensionalidad.